电泳疑难点：指示剂与染色剂

 

来源公众号：追光的人241010 

能开展电泳实验的学校属实不多，即使很多老师对本部分内容也是迷迷糊糊，似是而非，今天解决三个问题：

一、载样缓冲液与电泳缓冲液载样缓冲液就是把样品加在里面的，除此之外，还有指示剂、甘油、蔗糖等，使样品沉淀下来，不至于浮起来。

载样缓冲液要加到点样孔中。

电泳缓冲液就是加在电泳槽中的，维持PH，使DNA带负电，向正极移动。

二、指示剂与染色剂指示剂加到载样缓冲液中，相当于几百bp的DNA，肉眼可见，用来指示电泳进度，每个泳道的指示剂进度相同。

染色剂加到凝胶中，能与DNA非特异性结合，肉眼不可见，必须在300nm的紫外灯下观察，每个泳道位置可能不相同，代表的是实际DNA的位置。

三、影响迁移速率的因素凝胶相当于有不同孔径的海绵状结构，DNA分子穿过孔径向正极移动，分子越小，越容易穿过；孔径越大，越容易穿过；相同长度，环状比链状更易通过。

【典例】(2025·青岛二模)DNA因构象不同在电泳时的迁移速率有所差异。超螺旋DNA以超螺旋形式存在，分子体积小；线性DNA分子伸展，在凝胶中移动时受到的摩擦力较大；开环DNA是由环状DNA双链中的一条链发生断裂形成，分子更松散。下列说法正确的是(   )

A.电泳时需要留一个加样孔加入标准参照物

B.电泳时电泳指示剂加在凝胶中，核酸染料与PCR产物混合加入加样孔

C.电泳后的凝胶可直接观察DNA条带

D.三种构象的DNA在不同浓度的凝胶中迁移速率一定不同

解析：选A电泳时需要留一个加样孔加入标准参照物，A正确。配制琼脂糖凝胶时，待琼脂糖熔化稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀；电泳时，将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内，B错误。电泳后的凝胶置于波长为300 nm的紫外灯下，可观察到DNA条带，C错误。DNA的迁移速率与凝胶浓度、DNA分子的大小和构象有关，三种构象的DNA在不同浓度的凝胶中迁移速率可能相同，D错误。

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