平板为何倒置放？如何涂布？

 

 来源公众号：纯化大师 

平板为何倒置放？

在微生物培养过程中，常常需要用到固体培养基平板，新制备好的平板及菌体涂布后的平板往往需要倒置放置或倒置培养，其原因主要包括以下几点：

1.防止水分凝结和污染：

倒置培养皿可以防止培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基中，避免微生物的交叉污染。同时，倒置可以减少培养皿内的蒸发，保持培养基的湿度，有利于微生物的生长和繁殖。

2.维持培养基湿度：

倒置培养皿有助于保持培养基的湿度，因为培养皿底部有一个微小的凸起，使培养皿倒置时盖子与底部形成微小的缝隙，这个缝隙可以让水分从缝隙中挥发，从而减少培养基水分的蒸发。

3.避免菌落形态受影响：

微生物在培养基上生长形成的菌落形态是鉴定的重要依据之一。倒置的培养皿为微生物提供了相对稳定的气体交换环境，底部和盖子之间的间隙保证了空气流通，使微生物能正常进行呼吸作用等气体交换，同时又不会因外界环境剧烈变化而影响菌落的正常生长和形态形成。

4.减少杂菌污染的风险：

倒置培养时，平板内的空气流动减少，可以尽可能地减少外来杂菌的侵染，这对于保持培养环境的纯净度至关重要，避免了杂菌对培养基和培养物的污染。

5. 有利于菌落的观察和计数：

倒置时，平板受重力影响，培养基中的营养物质会聚集在培养基表面及表面以下，有利于微生物的生长和繁殖，同时，由于菌落相对不会太快扩散，更容易观察菌落特征以计数工作。

6. 方便操作和减少培养基与培养皿脱离：

倒置平板在拿取时能够保持原状，不易出现皿底和皿盖分离的情况，从而避免环境中杂菌的污染。同时，倒置可以减少培养基水分蒸发，维持琼脂等固体培养基中的水分，延缓培养基出现干裂的时间，因此有利于菌种的生长和繁殖。

7. 防止培养基龟裂：

在强制通风培养箱中，倒置平板可以减少培养基表面的空气流动，降低培养基水分蒸发速度，使得培养基不容易龟裂。

如何平板涂布？

平板涂布是一种常用的微生物接种方法，主要用于样品中的菌落计数、培养基的灵敏度验证及细菌的分离培养等方面。以下是平板涂布的一些关键技巧和注意事项：

1. 无菌准备：

• 提前对无菌室进行紫外线消毒灭菌。
• 操作者的衣着和手需进行清洁和消毒。
• 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌处理。
• 所有无菌操作都需在酒精灯旁进行。

2. 涂布前的准备：

• 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中进行消毒。
• 预制的平板在超净工作台中开盖吹15-30分钟或预培养1-2小时，使平皿表面保持相对干燥，防止涂布时水分过多造成菌落蔓延成片。

3. 涂布操作：

• 吸取适量样液或菌液滴加到培养基表面，建议每皿的加样量为0.1mL-0.2mL。
• 取出用75%酒精消毒后的涂布棒，略微晾干后，置酒精灯火焰上方灼烧灭菌，将灼烧后的涂布棒置于无菌空白平皿中冷却，再将平皿表面滴加的菌液均匀涂开。注意尽量避免将菌液涂到平皿边缘，影响计数。

4. 涂布后的培养：

• 涂布结束后，需将涂布棒灼烧灭菌后，再进行下一个样品的涂布操作。
• 涂布完成后，将平板平放于超净台上静置10分钟，使菌液渗透入培养基内，然后将平板放置于恒温培养箱中倒置培养。

5. 注意事项：

• 注意涂布力度，大小适宜，不应划破培养基的表面。
• 如果发现平板上水太多，处理后再使用。
• 切记写清楚标记。
• 试验完毕，注意灼烧涂布器，以免影响环境，造成交叉污染。

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